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血生化指標是動物實驗過程中判定實驗結(jié)果最常用的指標之一，因而血生化檢測結(jié)果的準確性直接影響動物實驗結(jié)果的正確性和可靠性。血清的處理方式是血生化指標檢測過程中的重要環(huán)節(jié)，如果血清處理不當，可直接影響血生化檢測結(jié)果的準確性。大鼠是醫(yī)學研究過程中使用頻率較高的實驗動物種類，本文選擇了大鼠的14項常規(guī)血生化指標進行了檢測，觀察4℃和-20℃兩種不同保存溫度下血清分別放置0h、4h、24h、96h、7d血生化指標的變化，為科研人員在血生化檢測方面提供技術(shù)指導。

1、 實驗方法

1）血生化測定 大鼠禁食12h，采集靜脈血液標本，靜置1h，分離血清并密封分裝后，分別存放于4℃和-20℃，應用全自動生化分析儀分別于分離血清后0h、4h、24h、96h、7d檢測谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、堿性磷酸酶（ALP）、總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、肌酐（CREA?J）、尿酸（UA）、尿素氮（UREA）、血糖（GLU）、總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL?C）、肌酸激酶（CK）和乳酸脫氫酶（LDH）等14項血生化指標。

2）統(tǒng)計學方法 采用SPSS13.0統(tǒng)計分析軟件進行處理，實驗數(shù)據(jù)以平均數(shù) ± 標準差（ ±ｓ）表示，數(shù)據(jù)間的比較采用t檢驗分析方法，以P＜0.05表示差異有顯著性。

2、結(jié)果

1）雌性SD大鼠血清存放于4℃下放置不同時間血生化指標的變化與oh相比，ALP在4h、24h、96h、7d均顯著降低（P＜0.05），ALB 在96h和7d均顯著升高（P＜0.01），CREA-J在96h顯著升高（P＜0.05），UA在24h、96h、7d均顯著升高（P＜0.01），其他指標差異無顯著性（P＞0.05）。詳見表１。

表1 雌性SD大鼠血清放置不同時間血生化指標的變化（`X ±ｓ，4℃）

注：與0h，∗P＜0.05，∗∗P＜0.01。

2）雄性SD大鼠血清存放于4℃下放置不同時間血生化指標的變化與0h相比，ALP在4h、24h、96h、7d均顯著降低（P＜0.05），ALB 在96h和7d均顯著升高（P＜0.05），CREA-J在96h和7d均顯著升高（P＜0.05），UA在24h、96h、7d均顯著升高（P＜0.01），其他指標差異無顯著性（P＞0.05）。詳見表2。

表2 雄性SD大鼠血清放置不同時間血生化指標的變化（`X ±ｓ，4℃）

注：與0h，∗P＜0.05，∗∗P＜0.01

        3）雌性SD大鼠血清存放于-20℃下放置不同時間血生化指標的變化與0h相比，AST在96h和7d顯著升高（P＜0.05），TP在4h和24h 顯著降低（P＜0.05），ALB 在4h、24h、96h、7d均顯著升高（P＜0.01），CREA-J在24h、96h、7d均顯著升高（P＜0.01），UA在4h、24h、96h、7d均顯著升高（P＜0.01），TC 在4h、24h、96h、7d均顯著升高（P＜0.05），TG 在96h和7d顯著升高（P＜0.05），CK在96h和7d顯著升高（P＜0.05），LDH在96h和7d顯著升高（P＜0.05），其他指標差異無顯著性（P＞0.05）。詳見表3。

表3 雌性SD大鼠血清放置不同時間血生化指標的變化（ `X ±S，-20℃）

注：與0h組比較，∗P＜0.05，∗∗P＜0.01。

  4）雄性SD大鼠血清存放于-20℃下放置不同時間血生化指標的變化與0h相比，ALT 在7d顯著升高（P＜0.01），AST 在96h和7d顯著升高（P＜0.05），TP在4h和24h 顯著降低（P＜0.01），ALB 在4h、24h、96h、7d均顯著升高（P＜0.01），CREA-J在96h和7d均顯著升高（P＜0.01），UA在4h、24h、96h、7d均顯著升高（P＜0.01），TC在4h、24h、96h、7d均顯著升高（P＜0.01），TG在96h和7d顯著升高（P＜0.05），CK在96h和7d顯著升高（P＜0.05），LDH 在96h和7d顯著升高（P＜0.05），其他指標差異無顯著性（P＞0.05）。詳見表4。

表4 雄性SD大鼠血清放置不同時間血生化指標的變化（`X±S，-20℃）

注：與0h組比較，∗P＜0.05，∗∗P＜0.01。

    為避免由于纖維蛋白未完全收縮造成血清中各成分濃度偏高，影響即刻值的準確性，此次試驗是在采集大鼠靜脈血后，先靜置1h，待血標本收縮充分后，再離心、檢測，測定的數(shù)值做為0h檢測數(shù)據(jù)。由于血生化檢測值受待檢動物來源、年齡、性別、血標本采集途徑、分離血清前標本靜置時間、檢測儀器以及檢測試劑等多重因素的影響，因此收集了與本研究動物來源、鼠齡、性別相同的SD大鼠內(nèi)部檢測數(shù)據(jù)作為正常值參考范圍。檢測結(jié)果顯示，0h樣本檢測值均在正常值參考范圍內(nèi)。

    本實驗研究結(jié)果表明，血生化檢測數(shù)據(jù)會因血清放置溫度和放置時間的不同而發(fā)生改變。變化的原因是血清放置過程中標本中水分的蒸發(fā)作用、細胞酸堿度變化以及紅細胞內(nèi)容物逸出等多方面的作用。

    由實驗結(jié)果分析，分離血清后，4℃保存時，放置4h后ALP指標較0h顯著降低；-20℃保存時，放置7dALP指標較0h仍無變化；由此，當需要測定ALP時，離心后的血清最好即刻檢測或者-20℃保存一周內(nèi)檢測。當需要測定UA時，由于采集的血清無論4℃還是-20℃保存，放置24h后UA值均顯著或極顯著升高，且放置7d時UA檢測值已經(jīng)超出正常參考值范圍，而4℃放置4h則無顯著變化，所以，離心后的血清最好即刻檢測 UA或者4℃保存4h內(nèi)必須檢測UA。當需要測定ALB和 CREA-J時，離心后的血清需4℃保存且需24h內(nèi)檢測。-20℃保存時，血清放置7dALT和AST 指標較0h均顯著升高，而4℃保存時，放置7d均無顯著變化；由此，當需要測定ALT和AST 時，血清4℃保存一周內(nèi)檢測即可。-20℃保存時，TP值出現(xiàn)波動，在4h和24h較0h顯著降低，96h和7d較0h無差異，在4℃保存時，放置7dTP值均無顯著變化，測定TP宜4℃保存7d內(nèi)進行。當測定TC、TG、LDL-C等血脂指標時，由于-20℃保存4h后較0hTC和TG均顯著或極顯著升高，而4℃保存時，放置7d均無顯著變化，故宜4℃保存血清并一周內(nèi)檢測。當測定心肌酶指標CK和 LDH 時，由于-20℃保存96h后較0h均顯著升高，而4℃保存時，放置7d均無顯著變化，故4℃保存血清并一周內(nèi)檢測即可。實驗結(jié)果顯示，無論4℃還是-20℃保存標本，放置7d內(nèi)UREA和GLU檢測值較0h均無顯著變化，故7d內(nèi)檢測即可。

    綜上所述，為了使研究人員更加便于參考，ALT、AST、TP、UREA、GLU、TC、TG、LDL-C、CK及LDH等生化指標的檢測，建議4℃保存血清并7d內(nèi)檢測即可；ALB和 CREA-J指標的檢測，建議4℃保存血清并24h內(nèi)檢測；由于放置時間和方式對UA指標影響較大，離心后的血清最好即刻檢測或者4℃保存4h內(nèi)檢測；對于ALP 的檢測，離心后的血清最好即刻檢測，如做不到，可-20℃保存一周內(nèi)檢測。

    總之，血生化測定指標不同，血清可放置的時間、放置的方式則不同，為保證血生化檢測結(jié)果的準確性和可靠性，實驗人員可根據(jù)所測指標選擇適宜的血清保存方式并及時送檢，同時，檢測人員也應該對血清及時進行檢測。此外，標本的采集時間、采集部位、標本是否溶血等也都是影響血生化檢測結(jié)果的重要因素，這些影響因素對大鼠血生化檢測結(jié)果的影響情況有待進一步探討。

原創(chuàng)作者：康愛君，李雨薇，王學文，劉君芳，胡建國，鄭振輝

原創(chuàng)單位：北京大學醫(yī)學部實驗動物科學部

發(fā)表雜志：中國比較醫(yī)學雜志2017年12月第27卷第12期